Tworzenie poliglutaminianów metotreksatu w oczyszczonych komórkach prekursorowych mieloidalnych z prawidłowego ludzkiego szpiku kostnego.

Niedojrzałe komórki prekursorowe szpikową preferencyjnie wybrano z prawidłowego ludzkiego szpiku kostnego, stosując techniki immuno-rozetkowe, w których stosowano przeciwciała monoklonalne przeciwko dojrzałym granulocytom, monocytom, limfocytom T i B oraz prekursorom erytrocytów (odpowiednio Mo5, M3, OKT3, B1 i EP1). Badaliśmy powstawanie, retencję i działanie cytotoksyczne poliglutaminianu metotreksatu (MTX) (MTX-PG) w oczyszczonych komórkach prekursorowych mieloidalnych. Po 1- i 24-godzinnej ekspozycji na MTX, z użyciem tymidyny i deoksyinozyny jako ratunku, wewnątrzkomórkowy profil MTX-PG badano za pomocą wysokociśnieniowej chromatografii cieczowej. Wzory plamek MTX-PG badano również po dodatkowych 1-i 24-godzinnych inkubacjach w pożywkach bez leków. Cytotoksyczne działanie zatrzymanych MTX-PG na prekursorach szpikowych szpiku kostnego badano przez tworzenie kolonii na półciekłym agarze bez leku. Normalne komórki prekursorowe mieloidalne przekształcają MTX w MTX-PG w sposób zależny od stężenia i czasu, preferencyjnie zachowując MTX-PG z trzema do pięciu reszt glutamylowych. Przy niskich stężeniach MTX (1 mikroM), tworzenie MTX-PG było niewystarczające do utrzymania nasycenia docelowej enzymu reduktazy dihydrofolianowej po usunięciu leku z pożywki inkubacyjnej i nie było zmniejszenia powstawania kolonii mieloidalnych. Przy wyższych stężeniach MTX (10 mikroM) tworzenie poliglutaminianów o wyższej masie cząsteczkowej było wystarczające, aby umożliwić 24-godzinne nasycenie wewnątrzkomórkowej zdolności wiązania po usunięciu pozakomórkowego leku i skutkowało 35% zmniejszeniem tworzenia się jednostek tworzących kolonie w kultura. Porównanie metabolizmu MTX w prawidłowych komórkach szpiku kostnego i linii komórkowej ludzkiej białaczki ludzkiej HL-60 wrażliwej na MTX wykazało dwukrotne większe tworzenie PG przez te komórki nowotworowe po 24-godzinnej ekspozycji na lub 10 mikroM MTX, a znakowane (większe niż 30- krotnie) zwiększenie cytotoksyczności komórek HL-60 w porównaniu ze zwykłymi prekursorami mieloidowymi, co sugeruje, że poliglutamowanie MTX może być ważne dla jego selektywnego działania przeciwnowotworowego.
[przypisy: kwiaty kwitnące w czerwcu, przewlekły nieżyt nosa krzyżówka, zdrada kontrolowana onet ]
[podobne: mięsień kulszowo goleniowy, badanie biochemiczne krwi, powiatowe centrum zdrowia otwock ]